ABSTRACT Members of the order Trypanorhyncha are cestode parasites that are frequently found infecting the muscles of several marine fish species, affecting fish health, and resulting in consumers’ rejection of fish. Fifty-two specimens of marine fish were freshly caught throughout the year 2020 from boat landing sites at the Alexandria coast along the Mediterranean Sea in Egypt, including the grey trigger fish Balistes carolinensis (F: Balistidae); the mottled grouper Mycteroperca rubra (F: Serranidae) and the common sole Solea vulgaris (F: Soleidae). Blastocysts were isolated and ruptured; the generated pleurocerci were described morphologically and morphometrically by light and scanning electron microscopy. Also, multiple-sequence alignment was performed, and a phylogenetic tree was constructed following maximum likelihood analysis of the 18s and 28s ribosomal RNA sequences of the recovered worms. Thirty fish were infected; the infection was recorded as blastocysts embedded in fish flesh. Three different parasitic species were recovered and classified morphologically as Gymnorhynchus isuri, Pseudotobothrium dipsacum and Heteronybelinia estigmena. The taxonomic position of these parasites was justified by molecular analysis of their 18s and 28s rRNAs, which revealed high percentages of homology with species recovered from the GenBank. The accession numbers ON157059, ON139663 and ON139662 were respectively assigned to the recovered parasites after their deposition in GenBank. The results obtained from the molecular analyses confirmed the morphological records of the recovered parasites. Since metacestodes are found in the musculature of infected fish specimens, it is necessary to remove these areas in the commercialization of fish.

RESUMO Os membros da ordem Trypanorhyncha são parasitas de cestóides que são freqüentemente encontrados infectando os músculos de várias espécies de peixes marinhos, afetando a saúde dos peixes e resultando na rejeição do peixe por parte dos consumidores. Cinqüenta e dois espécimes de peixes marinhos foram capturados recentemente durante todo o ano de 2020 nos locais de desembarque de barcos na costa de Alexandria ao longo do Mar Mediterrâneo, no Egito, incluindo o peixe de gatilho cinzento Balistes carolinensis (F: Balistidae); a garoupa mosqueada Mycteroperca rubra (F: Serranidae) e o linguado comum Solea vulgaris (F: Soleidae). Os blastocistos foram isolados e rompidos; os pleurocistos gerados foram descritos morfologicamente e morfometricamente por microscopia eletrônica de luz e varredura. Além disso, foi realizado o alinhamento de sequências múltiplas e uma árvore filogenética foi construída seguindo a análise de máxima probabilidade das sequências de RNA ribossômico de 18s e 28s dos vermes recuperados. Trinta peixes foram infectados; a infecção foi registrada como blastocistos embutidos na carne do peixe. Três espécies diferentes de parasitas foram recuperadas e classificadas morfologicamente como Gymnorhynchus isuri, Pseudotobothrium dipsacum e Heteronybelinia estigmena. A posição taxonômica desses parasitas foi justificada pela análise molecular de seus rRNAs de 18 e 28 anos, que revelou altas porcentagens de homologia com espécies recuperadas do GenBank. Os números de acesso ON157059, ON139663 e ON139662 foram respectivamente atribuídos aos parasitas recuperados após sua deposição no GenBank. Os resultados obtidos a partir das análises moleculares confirmaram os registros morfológicos dos parasitas recuperados. Como as metacestodes são encontradas na musculatura dos espécimes de peixes infectados, é necessário remover estas áreas na comercialização dos peixes.

RESUMO Os membros da família Diclidophoridae são espécies potencialmente perigosas para a aquicultura de peixes puffer em todo o mundo. Eles são parasitas poliopisthocotyleans, com uma hélice posterior equipada com pinças para fixação na superfície do hospedeiro, permitindo que o verme resista ao fluxo de água para manter sua posição nas brânquias. O corpo anterior do verme é deformável, e permite que o verme se alimente de sangue sugado das guelras dos peixes. O presente estudo é a primeira descrição de uma espécie Heterobothrium das guelras do tigre Lagocephalus sceleratus (Tetraodontidae) das costas do Golfo Arábico em Jubail, Arábia Saudita, usando morfologia por microscopia leve, bem como análise molecular do rRNA parcial do parasita 28S através de alinhamentos de sequências múltiplas e filogenia por análise de máxima verossimilhança que é fornecida pela primeira vez para as espécies descritas. Dezessete peixes tigre puffer foram capturados vivos da água marinha da Arábia Saudita; as brânquias foram separadas e mais tarde examinadas para detecção de infecção parasitária. Nove peixes foram encontrados infectados por um parasita monogênio robusto, equipado por dois órgãos bucais na extremidade anterior afilada; o hortetor posterior era retangular com quatro pinças dispostas simetricamente, sem istmo. Ausência de ganchos marginais. Ovário alongado, em forma de U, testículos numerosos, de forma irregular e estendido desde a parte posterior do ovário até a margem anterior do hortelino. Órgão copulatório muscular, como um copo esférico armado com 12 a 15 ganchos genitais. A análise molecular do parasita 28s rRNA e filogenia revelou uma porcentagem de identidades entre 87,47-89,09%, com espécies Diclidophoridae dentro do clade monofilético de Mazocraeidea onde uma porcentagem máxima de 89,09% foi obtida para o táxon-irmão morfologicamente diferente H. okamotoi. Os resultados obtidos da análise molecular são consistentes com as conclusões tiradas da classificação morfológica onde o parasita registrado era morfologicamente semelhante ao H. lamothei que não era caracterizado pela análise molecular antes. As sequências recuperadas foram depositadas no GeneBank sob o número de acesso MT322610.

ABSTRACT Members of the family Diclidophoridae are potentially dangerous species for the puffer fish aquaculture worldwide. They are parasitic polyopisthocotyleans, with a posterior haptor equipped with clamps for attachment to the host's surface, allowing the worm to resist the flow of water to maintain its position on gills. The anterior body of the worm is deformable, allows the worm to feed on blood sucked from fish gills. The present study is the first description of a Heterobothrium species from the gills of the tiger puffer Lagocephalus sceleratus (Tetraodontidae) from the coasts of the Arabian Gulf at Jubail, Saudi Arabia morphologically by light microscopy as well as by molecular analysis of the parasite partial 28S rRNA through multiple sequence alignments and phylogeny by maximum likelihood analysis which is provided for the first time for the described species. Seventeen tiger puffer fish were captured alive from marine water off Saudi Arabia; gills were separated and further examined for parasitic infection. Nine fish were found infected with a monogenean parasite which was robust, equipped by two buccal organs at the tapered anterior end; the posterior haptor was rectangular with four symmetrically arranged clamps, with no isthmus. Marginal hooks absent. Ovary elongated, U-shaped, testes numerous, irregularly shaped and extended from the posterior part of the ovary to the anterior margin of the haptor. Copulatory organ muscular, as a spherical cup armed with 12 to 15 genital hooks. The molecular analysis of the parasite 28s rRNA and phylogeny revealed a percentage of identities between 87.47-89.09%, with Diclidophoridae species within the monophyletic clade of Mazocraeidea where a maximum percentage of 89.09% were obtained for the morphologically different sister taxon H. okamotoi. The results obtained from molecular analysis are consistent with the conclusions drawn from morphological classification where that the parasite recorded was morphologically similar to H. lamothei which was not characterized by molecular analysis before. The recovered sequences were deposited into the GeneBank under accession number MT322610.

RESUMO O consumo de peixes tratados termicamente de forma inadequada é um risco à saúde pública devido à possível propagação das larvas de Anisakis e suas proteínas antigênicas, o agente causador da doença zoonótica anisakidose. O presente estudo demonstrou as alterações fisiológicas e histopatológicas que acompanharam a inoculação oral de extratos brutos de Anisakis Tipo II (L3) frescos e termicamente tratados em ratos Wistar albinos. Vermes nematoides foram isolados do peixe marinho Dicentrarchus labrax e foram examinados e identificados taxonomicamente usando microscopia óptica e eletrônica de varredura. O estudo foi realizado em 6 grupos de ratos: grupo controle (I), grupo inoculado com óleo de alho (GO) (II), grupo inoculado com L3 fresco (III), grupo inoculado com L3 tratado termicamente (IV), grupo inoculado com L3 + GO fresco (V), e grupo inoculado com L3 + GO tratado termicamente (VI). Observou-se que ratos inoculados com extrato bruto L3 fresco e tratado termicamente mostraram marcadores de estresse oxidativo anormais associados à destruição da estrutura normal do baço e do timo. GO produziu um efeito protetor em grupos de ratos inoculados com extrato L3 + administração de GO através da melhoria dos marcadores de estresse oxidativo, que foi confirmada pela marcante estrutura normal da histologia dos órgãos. O cozimento de peixes infectados com L3 induziu alterações fisiológicas e histopatológicas graves quando comparado com peixes infectados não cozidos. Recomenda-se a administração de alho antes e depois da ingestão do peixe para evitar o efeito perigoso dos anisakídeos, mesmo se cozidos.

ABSTRACT The consumption of inadequately thermally treated fish is a public health risk due to the possible propagation of Anisakis larvae and their antigenic proteins, the causative agent of the zoonotic disease anisakidosis. The present study demonstrated the physiological and histopathological changes that accompanied an oral inoculation of crude extracts from fresh and thermally treated Anisakis Type II (L3) in Wistar albino rats. Nematode worms were isolated from the marine fish Dicentrarchus labrax. They were examined and taxonomically identified using light and scanning electron microscopy. The study was performed in 6 rat groups: a control group (I), a garlic oil (GO) inoculated group (II), a fresh L3 inoculated group (III), a thermally treated L3 inoculated group (IV), a fresh L3 + GO inoculated group (V), and a thermally treated L3 + GO inoculated group (VI). It was observed that rats inoculated with fresh and thermally treated L3 crude extracts showed abnormal oxidative stress markers associated with the destruction of normal architecture of spleen and thymus. GO produced a protective effect in rat groups inoculated with L3 extracts + GO administration via the amelioration of oxidative stress markers, which was confirmed by the marked normal structure of the organs’ histology. Cooking of L3 infected fish induced severe physiological and histopathological alterations compared to uncooked infected fish. The administration of garlic before and after fish eating is recommended to avoid the dangerous effect of anisakids, even if they are cooked.